2012年8月媒体报道，某检测中心对国内三家葡萄酒上市公司的十款葡萄酒进行检测后发现农药多菌灵、甲霜灵超标，这两种农药均对人体存在致癌风险。消息一经报道，又一次引起了人们对农药残留的关注，多菌灵、甲霜灵的检测成为检测机构关注热点。查阅已发表文章中关于农药残留的检测方法，发现大量文献报道使用AB SCIEX公司仪器检测食品中农药残留[1]，参考文献报道方法建立关于多菌灵和甲霜灵的LC-MS/MS检测方法。
为了更有效检测和监控多菌灵和甲霜灵残留，需对上述两种杀菌剂同时进行检测。AB SCIEX公司一直致力于为用户提供全方位的解决方案，包含 iDQuant™ 农残筛查标样试剂包（见图1左图），试剂包含两百余种农药标准溶液，除此之外整体方案还提供成熟的适用于多种基体样品中农药残留 iMethod™ 测试方法包[2]（见图1右图），供广大检测机构选择。以下列出在葡萄酒中上述两种农药的检测的详细实验方法。
图1 AB SCIEX公司整体解决方案
1.样品前处理方法
称取10.0 g样品于50 mL烧杯中，加入20 mL水溶液，稀释混匀，待净化。
依次用3.0mL的正已烷+乙酸乙酯（1+1），3.0mL去离子水活化HLB 小柱，待净化的样品6.0mL加至SPE净化柱，萃取过程需要在负压条件下进行，最后用6.0mL的去离子水洗涤提取容器，一并过柱，抽真空2 min，将小柱抽干；同时准备活化氨基－硫酸镁小柱，在LC- NH2氨基小柱中装入1/3高度的无水硫酸镁，用5 mL正已烷+乙酸乙酯（1+1）活化氨基－硫酸镁小柱，最后保持填料上剩余0.5 mL正已烷+乙酸乙酯（1+1）活化溶液；由上而下将HLB 小柱（上）NH2小柱（下）进行串联，用15 mL正已烷+乙酸乙酯（1+1）分三次对串联小柱进行洗脱，并且洗脱开始时需要负压抽真空，以便洗脱进行，收集全部洗脱液于15 mL玻璃刻度试管，置于40 ℃下氮吹干，用甲醇:水为5:95溶解残渣，定容至1.0 mL，取上层清液供LC/MS/MS分析。
2.LC-MS/MS仪器条件
(1) 液相色谱参数：
色谱柱： Phenomenex Synergi Fusion-RP 2.0X50mm，4um
流动相：A：水（含5mM 甲酸铵） B：甲醇（含5mM 甲酸铵）
柱温：30℃，流速：250μl/min；
流动相：A：水（5mM乙酸铵），B：甲醇（5mM乙酸铵）；
梯度洗脱，洗脱条件见表1：
表1液相色谱条件
|
Time(min) |
Flow Rate (μL/min) |
A(%) |
B(%) |
|
0 |
250 |
95 |
5 |
|
5 |
250 |
50 |
50 |
|
12 |
250 |
10 |
90 |
|
14 |
250 |
10 |
90 |
|
16 |
250 |
95 |
5 |
|
17 |
250 |
95 |
5 |
(2) 质谱条件参数：
离子源： Turbo V™ 离子源；
扫描模式：正离子
采集模式：多反应监测MRM
表2 多菌灵和甲霜灵的离子对及参数信息表
|
编号 |
英文名 |
中文名 |
Q1 |
Q3 |
RT (min) |
|
1 |
Carbendazim |
多菌灵 |
192.2 |
160.1* |
7.8 |
|
2 |
Metalaxyl |
甲霜灵 |
280.2 |
220.2* |
10.2 |
注：带*为定量离子对；
以上质谱参数适用于AB SCIEX公司API TripleQuad 3200/4000/4500/5000/5500/6500以及QTRAP 3200/4000/4500/5500/6500型号仪器；
实验结果
多菌灵和甲霜灵总离子谱图如下：
结论
AB SCIEX提供的全方位解决方案，可同时测定葡萄酒中多菌灵和甲霜灵。
参考文献
[1] Kaushik Banerjee, Dasharath P. Oulkar, Soma Dasgupta. Validation and uncertainty analysis of a multi-residue method for pesticides in grapes using ethyl acetate extraction and liquid chromatography–tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A, 2007,1173: 98–109
[2] AB SCIEX官方网站有关食品及饮料残留检测方法的网页：http://www.absciex.com.cn/products/methods/imethod-tests-for-food-and-beverage