除非特殊说明,在所有情况下,所用溶剂的体积应该是色谱柱体积的 40-60 倍。
应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等,比较色谱柱性能的改善,以确定清
洗的效果。
确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液,清洗前所用的溶剂应与最初清洗时所用的溶剂相溶。
应确保实验测试时所用的流动相与色谱柱中最后的溶剂相溶。
1 正相填料
用四氢呋喃冲洗。
用甲醇冲洗。
用四氢呋喃冲洗。
二氯甲烷冲洗。
用无苯正己烷冲洗。
2 反相填料
用 HPLC 级水冲洗,冲洗时进 4 等份的 200µl 的二甲亚砜(DMSO)。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。
用甲醇冲洗。
3 阴离子交换填料
用 HPLC 级水冲洗。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。
4 阳离子交换填料
用 HPLC 级水冲洗;在冲洗的过程中进 4 等份 200µl 的 DMSO
四氢呋喃冲洗。
5 蛋白质凝胶过滤填料
去除蛋白质尺寸排阻介质中的污染物有两种清洗/再生的方法。
弱保留蛋白质
用 30moL/L pH3.0 磷酸盐缓冲液冲洗。
强保留蛋白质
用 100%的水到 100%的乙腈梯度洗脱 60min。
6 多孔石墨化碳
多孔石墨碳有四种再生的方法,选用哪一种方法依赖于被分析物和所用的溶剂。
酸碱再生
适合于使用极性流动相分析离子类分析物。
将色谱柱倒装
用 50ml 含 0.1%三氟乙酸的四氢呋喃/水(1:1)溶液 1ml/min 流速冲冼。
用 50ml 含 0.1%三乙胺或氢氧化钠的四氢呋喃/水(1:1)溶液 1ml/min 流速冲冼。
用 50ml 含 0.1%三氟乙酸的四氢呋喃/水(1:1)溶液 1ml/min 流速冲冼。
用 95%甲醇水溶液冲洗重新平衡。
将色谱柱改为正向。
作者:英国的 R.Plumb-Glaxo
强有机溶剂再生
适合于水相分析极性或离子类分析物。
用 50ml 丙酮以 1ml/min 流速冲洗。
用 120ml 二丁醚以 1ml/min 流速冲洗。
用 50ml 丙酮以 1ml/min 流速冲洗。
用水冲冼至平衡。
正相再生
适合于主要使用正相流动相的多孔石墨化碳柱。
用 50ml 二氯甲烷以 1ml/min 流速冲洗。
用 50ml 甲醇以 1ml/min 流速冲洗。
用 50ml 水以 1ml/min 流速冲洗。
用 50ml 0.1mol/L 盐酸以 1ml/min 流速冲洗。
用 50ml 水以流速 1ml/min 冲洗。
用 50ml 甲醇以 1ml/min 流速冲洗。
用 50ml 二氯甲烷以 1ml/min 流速冲洗。
用流动相冲冼至平衡。