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3M 乳酸菌测试片操作以及判读 |
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2*MRS的操作步骤 |
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 1、按说明书要求的2倍用量制备2×MRS肉汤。例如：如果说明书要求1L水中加入55gMRS,则2×MRS则为1L水中加入110gMRS. |
 2、用标准稀释液制备1：10样品稀释液，该样品稀释液可用于检测其他微生物。 |
 3、用1mL 3M电子加样器将1：10样品稀释液做1：2稀释。先取0.5mL肉2×MRS肉汤，然后再吸取0.5mL 1:10样品稀释液，混匀后即可获得含单倍 MRS的1：20样品稀释液。 |
 4、接种：在PAC检测片上接种1mL 1：20样品稀释液（0.5mL 1：10标准稀释液+0.5mL 2×MRS肉汤＝1:20含单倍MRS的样品稀释液）。 |
 5、培养：厌氧培养测试片。将检测片透明膜一面朝上放入厌氧罐中，叠放数量不得超过20片。如果检测片超过20片，可在同一罐中用一个坚硬的分隔器将检测片分开培养。将厌氧罐放入30℃～35℃（86℃～95℉）培养箱中培养48＋3h. |
 6、判读：PAC测试片可在标准菌落计数器或其他放大光源下计数。测试片赏的菌落数×稀释倍数（20）即为每毫升样品中酸乳菌数。详见判读手册。 |
| 4*MRS肉汤的操作程序 | |
| 1、 按说明书要求的4倍用量制备4*MRS肉汤 2、 用标准稀释液制备1：10样品稀释液（11g/99mL或25g/225mL）。取8mL供其它种类的微生物检测用。 3、 将4*MRS肉汤加入1：10标准样品稀释液中，将获得含0.5 MRS的样品稀释液。 * 如果稀释液中含有11g样品、99mL标准稀释液，接种其它微生物测试片后，再加入18mL 4*MRS肉汤。 PAC测试片上生长的菌落数乘以11即为最终结果（个/g）。 * 如果稀释液中含有25g样品、255mL标准稀释液，接种其它微生物检测片后，再加入41mL 4*MRS肉汤。 PAC测试片上生长的菌落数乘以11即为最终结果（个/g）。 |
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 1、制备至少1：10或更高稀释度的样品稀释液。称量食品样品于WirPak取样袋、均质袋、稀释瓶或其它适合的消容器中。 |
 2、加入适当的肉汤稀释液，稀释液的配置方法根据说明书制备。如果使用一种1：10稀释液检测多种微生物，3M公司提供了更为简便的多种菌检测程序（见前页）。 |
 3、如果需要进行多倍稀释，肉汤稀释液只能用于最终稀释步骤。初始稀释可使用标准稀释液，包括磷酸盐缓冲液（ID）F磷酸盐缓冲液，0.0425g/L KH2POI4 Ph7.2) 、0.1%蛋白胶水，蛋白胶盐稀释液（ISO方法6887）、蛋白胶水缓冲液（ISO方法6579）、生理盐水（0.85～0.90％），不含亚硫酸氢盐的 Letheen肉汤或蒸馏水，每步稀释都应充分混匀。 |
 4、接种：按操作说明接种1.0mL样品稀释液于Petrifilm |
 5、培养：厌氧培养测试片。将测试片透明面朝上放入GASPak厌氧罐中，叠放数量不得超过20片。如果检测片超过20片，可在同一罐中用一个坚硬的分隔器将检测片分开培养。将厌氧罐放入30℃～35℃（86℉～95℉）培养箱中培养48＋3h. |
 6、判读：Petrifilm: PAC测试片可在标准菌落计数器或其他放大光源下计数。测试片赏的菌落数乘以稀释倍数，可获得每毫升样品中酸乳菌落数。详见判读手册。 |
| 判读手册 | |
 Count=238使用PAC测试片,用MRS肉汤稀释样品和厌养,可促进同型发酵的乳酸菌生长. 图1为同型发酵的乳酸菌落(不带气泡)的例子. |
 Count=30测试片中有导型发家哦的乳酸菌(产气)和同型发酵的乳酸菌.用MRS肉汤稀释, 使异型发酵的乳酸菌在暗影背景下有明显气泡产生(见黑圈1) 生长区边缘的异型发酵乳酸菌菌落大约在1/4英寸时,可能不产生可视的气泡(见黑圈2). |
 Count=0图3是用MRS内汤为稀释液接种PAC测试片作为对照,以MRS为稀释液及厌氧培养将在测试片上产生一个稍显暗色的浅色圆形生长区域. |
 Count=60测试片最适宜计数范围是25-250个菌落,计数所有菌落,不管其大小和颜色深浅. |
 Estimated count=440 测试片面积约为20cm2 .当菌落数超过250个(如图5所示)时,可估算菌落数.选择其中一个或数个有代表性菌落的小方格(1cm2 ),计算平均菌落数,在乘以20可得到测试片上的菌落总数. |
 Count=TNTC(Estimated count=106)当菌落数多不可计(tntc)时,整个生长区可能变为粉红色,如图6所示.将测试片与以MRS肉汤作对照的测试片做比较,因为测试片的颜色变化是微小的(见图3),此种情况下样品需作进一步稀释. |
 Count=TNTC(Estimated count=106)仔细观察,在测试片生长区中心和边缘处可见针尖大小的菌落,计录为TNTC结果. |
 Conut=TNTC(Estimated count=108)当菌落数很多时,许多针尖大小的菌落会环绕在生长区边缘,记录为TNTC. |
 Count=TNTC图9是TNTC的又一个例子.同型发酵乳酸菌菌落(无气泡产生)(黑圈1)与异型发酵乳酸菌菌落(有气泡产生)(黑圈2)同时出现. |
 Count=52人为的气泡可能是不适当的接种所致,他们形状不规则,且不与菌落相连接 |
